Testul generării de trombină

Această abordare metodologică a fost propusă de cercetătorii britanici în 1953 pentru a evalua starea sistemului de hemostaza în hemofilie. Trebuie remarcat, totuși, că metoda propusă în original a fost foarte departe de a fi perfectă, așa că pentru o lungă perioadă de timp, ea nu a fost dat o atenție serioasă. A doua metodă de naștere supraviețuiește datorită HEMKER Conrad, care a făcut numeroase îmbunătățiri în cadrul procedurii de analiză în anii '90 ai secolului trecut. Cea mai importantă modificare HEMKER K. și colab. a fost utilizarea de substraturi flyuoro- și cromogene pentru detectarea generării trombinei, care a crescut în mod semnificativ reproductibilitatea metodei. In prezentul exemplu de realizare, metoda de trombina formată în timpul reacției distruge substratul peptidic care determină eliberarea moleculei fluorofor. schimbarea intensității emisiei este detectată de către un fluorometru la intervale regulate.

Principiul metodei

Testul se bazează pe menținerea vitezei de hidroliză a substratului fluorogenic legăturii peptidice specifice pentru trombină. Determinarea substratului ratei fractură fluorometru este realizată în godeurile unei plăci cu 96 de godeuri, în care amestecul a fost incubat proba PRP cu activator de coagulare. Ca utilizare activator de reactiv recombinant factor tisular și clorură de calciu și de a standardiza și de a îmbunătăți rata de coagulare în sistemul de testare sunt fosfolipide adăugate. Studiul cineticii de generare a trombinei ne permite să se estimeze echilibrul procoagulant și a mecanismelor de anticoagulant.

Reactivi și echipament

• Factorul uman recombinant de țesut (1 pmol).
• trombina specific substrat fluorogenic.
• Soluția tampon care conține clorură de calciu.
• Calibrator cu activitatea trombinei umane 580 nmol.
• Fluorometru.

Probele de sânge pentru cercetare

Ca o înregistrare thromboelastogram eșantion folosesc BTP. O serie de studii pentru a ține cont de aportul de trombocite în generarea de trombină sugerează folosind plasmă bogată în plachete. Testul este foarte sensibil la defectele și caracteristicile de fază de pre-analitică a studiului.

Video: prelegere 29 - Metode test de generare

tehnica de performanță

Procedura de investigare se efectuează în conformitate cu instrucțiunile pentru echipamentul utilizat și algoritmul unui program de calculator care calculează dinamica principalilor indicatori de generare a trombinei.

Evaluarea rezultatelor studiului

substrat fluorogenic specific pentru trombina, astfel încât schimbarea intensității luminescenta după adăugarea activator de coagulare proporțională cu viteza de generare a acestei enzime cheie coagulant.

După cantitatea de calibrare standard a trombinei fluorometru permite construirea unei curbe de generare a trombinei. Studiul a evaluat timpul de întârziere a formării trombinei (timpul Lag), valoarea maximă a trombinei (trombină Peak), timpul pentru a ajunge la trombina maximă (ttPeak), precum și potențialul de trombina endogen (ETP).

Interpretarea rezultatelor sondajului

Datorită faptului că factorul de coagulare este o enzimă cheie pe hemostaza de coagulare, testul de generare a trombinei este un indicator valoros al coagulare a sângelui integral.

Rezultatele testelor depind de metoda de activare a concentrației activator de coagulare, și mulți alți factori, astfel încât condițiile în schimbare tehnica permite să se adapteze pentru a detecta o varietate de defecte în sistemul hemostatic. Astfel, adăugarea de trombomodulinei într-un sistem de testare ajută la identificarea schimburi de hipercoagulabilitate în mutațiile de fundal leydenovskoy. Studiul generării de trombină în plasmă bogată în trombocite face posibilă detectarea disfuncției hemostazei plachetare Glantsmana thrombasthenia, sindromul Bernard-Soulier și altele.

Activarea cel mai frecvent utilizate de coagulare BTP factor tisular care permite evaluarea stării de coagulare. Această performanță la pacienții cu hemofilie timp si alte coagulopatii masura Lag este prelungită, iar ETP și Vârful trombina redusă. Intensitatea acestor modificări la acești pacienți depinde de activitatea factorilor de coagulare VIII și IX.

Cauzele erorilor

Erori de fază preanalytical a studiului, în Vol. H. Dozajul greșită citrat la un gard de sânge venos.

• Defecte centrifugare la obținerea probelor de PRP.
• Contactul cu heparină studiat sânge de la cateter venos.
• Hemoliza.

Alte tehnici analitice

In prezent dezvoltat alte tehnici analitice capabile permite vizualizarea procesului de coagulare, cum ar fi metoda de înregistrare a creșterii cheagului spațială și thromboelastography. Toate aceste tehnici de vizualizare de coagulare a sângelui și sunt capabili de a calcula parametrii de coagulare integrale, dar specificitatea lor de diagnosticare este încă scăzut.