Hibridizarea anticorpilor mARN și ADN. v- localizare si gene in genomul imunoglobuline

In experimentele pe hibridizarea ARNm și ADN diferit, mai ales devreme, de obicei, obținut curba bifazica cu zona de tranziție într-o regiune și un al doilea scăzută - în valorile ridicate Cot4l.

Utilizare pentru opresiune ARNm nemarcată hibridizare, care codifică L-lanț al unei regiuni-C omoloage sau heterologe a permis deja să se stabilească faptul că valori ridicate datorită hibridizării genei Cotih C și că numărul acestor gene nu depășesc limitele a două - patru per genom haploid. Prezența câmpului cu valori scăzute Coth cercetători o parte considerate ca dovadă a unui număr semnificativ de „germinale» V-gene. Cu toate acestea, creșterea purității preparatelor de ARNm și utilizarea fragmentelor de ARNm, care conține și secvența poliA a arătat că V-gene sunt de asemenea unice, și că ele sunt prezentate în genomul într-o cantitate care nu depășește două sau trei exemplare în ultimii ani.

Luați în considerare exemplele de date Experimente de hibridizare de pe ARNm, care codifică sinteza lambda-L-lanț murine mielom MOPC 104E cu ADN-ul de la myshn ficat (Matthyssens e. a., 1976). Pe baza datelor privind structura primară a Regiunile V ale tuturor investigate în prezent șoareci cu lanț lambda (18 probe) împărțite în șapte subgrupuri. În cazul în care pentru fiecare V-regiune există un V-genă specială, acesta trebuie să fie detectat 7 V gene in genomul mouse-ului. De fapt, numărul lor nu poate fi mai mică de 145 (în aceste condiții, probabilitatea de a detecta cele șapte subgrupe diferite în studiu un total de 18 probe de este crescut la 90% - 50% probabilitate de numărul de V-gene trebuie să fie de cel puțin 25). Hibridizarea a fost determinată din curba care V-gena pentru L-lanț MOPC 104E se repetă în genomul nu mai mult de 2-3 ori. În același timp, gradul de omologie cu două mRNAs care codifică sinteza a două lanțuri lambda, chiar aparținând două subgrupe diferite (MOPC 104E și NORS 2020), foarte mari. Extrapolând aceste date la restul ARNm care codifică catena lambda, se poate concluziona că, cu această similitudine între V-domenii ale acestor lanțuri L-ARNm MOPC 104E ar fi gnbridizovatsya cu toate acestea și, prin urmare, valorile Cot ar trebui să fie considerabil mai mici decât sunt definite în experiment (mai multe repetari, cea mai mică valoare Cot ,,,). Aceste date sugerează, prin urmare, împotriva prezenței în genomul unui număr mare de gene V și, prin urmare, în favoarea mutației somatice ca factor principal, oferind o varietate de anticorpi (imunoglobuline).

Ar trebui, totuși, să se constate că metoda de hibridizare Este destul de complicată și, aparent, nu permite să interpreteze în mod clar rezultatele. Astfel, în contrast cu experimentele descrise mai sus, folosind ADNc pentru v- și C-domenii în mod separat (ADNc și kDPKs) a fost găsit hibridizare kDNKu specificitate ridicată la ARNm (Smith, 1977- Stavnezer, Bishop, 1977). Sa constatat că, în timp ce kDNKs hibridizează în mod egal cu toate ARNm-care codifică tipul kappa L-lanț kDNKu reacționează numai cu kappa ARNm omolog. Acest lucru indică faptul că numărul de V-gene este determinată prin hibridizare poate fi subestimat.

În același timp, metoda hibridizare Sa dovedit a fi foarte util pentru studierea localizării și C-V gene in genomul celular. Recent, această metodă a fost în măsură să demonstreze reorganizarea somatică a genelor care codifică VY și C-regiunea a unei imunoglobuline. Sa demonstrat că în embrionare de șoarece și genomului V C-gsny separate, în timp ce în tumoare (plasma-niți MOPC 321, NORS 2020), acestea sunt situate în apropiere (topit).

curbe ARNm hibridizeze la ADN, derivate din celule hepatice si de mielom, au fost aproape identice. Acest lucru înseamnă că, în celulele care produc imunoglobuline, nu există nici o amplificare a genelor care le codifică.

Astfel, în prezent găsit, genomului care are 2 sau 3 al genei ce codifică V regiunea lanțurilor lambda, 2 sau 3 genei care codifică V-regiunea lanțului kappa, și 2-4 ale genei care codifică regiunea C de L-lanțuri.

în primul rând, există Compusul și C-V gene, atunci această bucată de ADN plus 200-450 nucleotide netraduse transcrisă în ARNm, care după aderarea la capătul 200 3`-polyA nucleotidă transportat la citoplasmă și este inclus în poliribozomilor, care codifică sinteza precursorilor lanțurilor polipeptidice de imunoglobuline.

După scindarea precursorului ekstrapeptidov (Și poate, înainte) începe asamblarea moleculelor de imunoglobulină, transferați-le în vezicule microzomale și fie secreție sau încorporarea în membrana celulară.