Genele sintetizare de anticorpi. Numarul de gene implicate în sinteza imunoglobulinelor

primare de cercetare structura și genetica imunoglobuline Aceasta a condus la concluzia că fiecare lanț nolipeptidnaya este codificat de cel puțin două gene: V-gena responsabilă pentru regiunea variabilă și C-gepami responsabilă pentru regiunile constante ale moleculelor. Numarul ambelor gene in genomul celulelor este de interes fundamental. Faptul că diversitatea observată a anticorpilor de către diferiți autori explicat fie în termeni de „germen“ teoria genelor, potrivit căreia în genomul unui set de gene pentru toate cunoscute V-domenii, adică. E. Mai multe mii de V-gene, fie din punct de vedere al teoriei mutației somatice prin care un set de V gene in genomul este limitat, și o varietate de structuri de imunoglobuline (anticorpi) apare ca un rezultat al mutației somatice. Există, de asemenea, un punct de vedere compromis. Toate aceste idei discutate exhaustiv pentru a deveni un lider și co-autori (Leder e. A., 1974), astfel încât mai multe detalii nu le vom opri.

Rețineți că AE Gurvitch și R. S. Nezlin (1965) a fost făcută ipoteza inițială că secțiunile individuale ale genomului codifica anticorpi si centre active și care L-II- și DITs „aduna“ din lanțuri mai mici, sintetizate în mod independent. Este extrem de interesant faptul că, după cinci ani, aceste idei re-apărut în forma ipotezei „punere în aplicare» ( «introducere») informații codificate de polinucleotidele mici (circa 30-45 nucleotide), asigurând disponibilitatea CDR-uri din H și L-lanțuri (Wu, Kabat, 1970).

final răspunsul la aceste întrebări, în mod evident, nu poate oferi decât o determinare directă a și C-V gene in genomul. Izolarea preparatelor de ARNm cu un grad ridicat de puritate corespunzătoare a permis experimente de pornire. Abordarea dezvoltată de un număr de ani, este de a determina numărul de gene prin hibridizare ADN-ARN. Deoarece structura ARNm transcris structura porțiunii de ADN complet complementare, atunci această metodă se poate determina numărul de gene și pentru a determina dacă amplificarea lor are loc (multiplicarea) pentru inducerea sintezei de imunoglobuline.

În prezent, cercetarea acest tip sunt realizate cu mARN, care codifică sinteza L-lanțuri ca preparate suficient de pure ale N-ARNm nu este încă obținut. O condiție esențială pentru efectuarea acestor experimente este, în primul rând, puritatea preparatului ARNm și activitatea specifică ridicată și, pe de altă parte, prezența unui exces foarte mare de ADN. Ia-vysokomechenye droguri mARN este dificil. De obicei, aceasta se face folosind ARNm izolat celule NT cultivate în prezența unor doze mari sau predshsstvennikov 32P-3H- sau mai mult - ARNm marcate cu 125l in vitro (Farace ea, 1976- Matthyssens e un 1976 ....). Există, de asemenea, o versiune indirectă a metodei. Acesta constă în faptul că la început prin transcriptază inversă pe ARNm preparat matrice vysokomechenuyu ADN complementar (ADNc) și este deja utilizat pentru hibridizarea ADN-ului celular (Schechter e. A., 1976- Storb e. A., 1976).

MARN-ul purificat sau ADNc- hibridizat cu anumite condiții denaturate (sonicare) sau ADN-ul din ficat de celule de mielom de șoarece NS și procentul de ARN legat (sau ADNc) ca o funcție a timpului de hibridizare. (Determinarea se bazează pe stabilitatea hibrizilor efectului RNazei.) În aceste condiții, procentul de ARN hibridizar (ADNc) (f) depinde de concentrația de ARN (ADNc) (Ro), concentrația de ADN (C) și timpi de incubare (f). Cu un exces foarte mare de ADN nu depinde de f R0 și depinde numai de C „și t (Cot). Pătuțul cantitate, la care hibridizare este de 50%, în mod evident, depinde de gradul de complementaritate al ADN-ului și a ARNm (ADNc).

gradul de omologie a două ARNm (Și, prin urmare, V sau S-genă) este determinată într-un experimente de inhibare competitivă de hibridizare a marcat preparare ARNm medicamente nemarcate ARNm omologe și heterologe sau prin izolarea ADN-ului de la hibrid format, și hibridizarea acestuia cu alte omoloage etichetate și ARNm heterolog. Comparând aceste rezultate cu datele referitoare la structura primară a acestor polipeptide care sunt codificate de mARN examinate, se poate observa dacă curba definită de frecvența repetiției hibridizare a genelor cu o valoare estimată din datele privind omologie și C-V domenii.